| "Teoría:
Tema 1.- Historia de la tecnología del DNA recombinante. Aplicaciones..
Tema 2.- Nucleasas. Funciones biológicas. Enzimas de restricción. Principales tipos de sistemas de restricción-modificación. Nomenclatura. Metilasas.
Tema 3.- Electroforesis en geles de agarosa. y poliacrilamida. Electroforesis en campo pulsado (PFGE). Recuperación de fragmentos de ADN. Southern, Northern y Western. Uso de los enzimas de restricción en la realización de mapas físicos de DNA.
Tema 4.- Ligasas. Técnicas de ligación. Uso de adaptadores. Fosfatasa alcalina. DNA polimerasas. Otras enzimas de modificación de ácidos nucleicos.
Tema 5.- Vectores para la clonación de DNA exógeno. Características de los plásmidos. Tipos de plásmidos. Modo de replicación de plásmidos. Métodos para el aislamiento de plásmidos.
Tema 6.- Introducción de DNA exógeno en bacterias. Transformación. Competencia natural. Competencia artificial. Electroporación. Transducción. Conjugación.
Tema 7.- Selección de transformantes. Métodos genéticos: vectores especiales. Métodos bioquímicos. Métodos inmunológicos. Métodos de hibridación de ácidos nucleicos.
Tema 8.- Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Diseño de “primers”. Aplicaciones en clonación de genes, retro-PCR, PCR diagnóstico, medicina forense, AFLPs, RAPDs. Mutagénesis por PCR.
Tema 9.- Secuenciación de ADN: Método químico; Método enzimático; Sistemas automáticos; Secuenciación cíclica; Estrategias de secuenciación.
Tema 10.- Vectores de clonación basados en el fago lambda. Encapsidación “in vitro”. Cósmidos. Fagos filamentosos. Fagémidos.
Tema 11.- Obtención de genotecas en Escherichia coli. Estrategias de rastreo y utilización de genotecas.
Tema 12.- Expresión de genes clonados en E. coli. Mecanismos de control. RNA polimerasa. Factores sigma. Promotores. Sitios de unión a ribosomas.
Tema 13.- Otros factores que afectan la expresión de genes en E. coli: Terminación de la transcripción; Antiterminación; Estabilidad de mensajeros; Uso de codones. Vectores de expresión. Proteínas de fusión. Epitope tagging.
Tema 14.- Expresión de genes in vitro: minicélulas, maxicélulas, transcripción-traducción in vitro. Problemas en la expresión heteróloga de genes.
Tema 15.- Análisis funcional de genes: Estrategias de inactivación génica por recombinación homóloga.
Prácticas:
Las clases prácticas consistirán la realización de un experimento de clonación molecular en Escherichia coli, e implicará el aislamiento de DNA plasmídico, digestiones de DNA, electroforesis en geles de agarosa, aislamiento de DNA a partir de geles de agarosa, ligaciones, transformación con ADN exógeno. Para la identificación del gen de interés se utilizarán métodos genéticos, bioquímicos o de hibridación de ácidos nucleicos.
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